%A 张相民，刘联斌，曾汶，周茂华，叶桂林，叶永强，王刚，李韶今 %T AMPK过表达慢病毒载体的构建及稳定转染肺癌A549细胞株的建立 %0 Journal Article %D 2017 %J 国际肿瘤学杂志 %R 10.3760/cma.j.issn.1673-422X.2017.10.001 %P 721-726 %V 44 %N 10 %U {https://gjzlx.sdfmu.edu.cn/CN/abstract/article_10319.shtml} %8 2017-10-08 %X 目的通过构建表达载体，建立稳定转染腺苷酸活化蛋白激酶（AMPK）的肺癌A549细胞株，观察过表达AMPK后对A549细胞增殖、侵袭能力的影响。方法扩增AMPK全长序列，双酶切目的基因并插入GV358载体，共转染293T细胞进行慢病毒包装，收集慢病毒上清液后感染A549细胞，建立稳定过表达AMPK的A549细胞株。实时荧光定量PCR(qRTPCR)和Western blotting检测AMPK的表达情况，四甲基偶氮唑蓝（MTT）及Transwell法检测A549细胞增殖、侵袭能力的变化。结果经限制内切酶鉴定及测序分析，成功构建了GV358AMPK慢病毒表达载体质粒。与转染空载体相比，转染GV358慢病毒载体的A549细胞AMPK蛋白表达升高5.87倍（P=0.002），mRNA水平升高16.12倍（P＜0.001）；A549细胞过表达AMPK后，第4～5天细胞增殖活性显著降低（第4天：0.53±0.03∶0.64±0.05，P=0.021；第5天：0.58±0.04∶0.80±0.07，P=0.002），侵袭能力显著减弱［（1.6±0.5）×105∶(3.4±0.3)×105，P=0.004］。结论成功构建了AMPK慢病毒表达载体和稳定表达A549细胞株，过表达AMPK可抑制A549细胞增殖及侵袭能力。