%A 赵维山，朱燕昆，王若天，管傲然，李汝红 %T 过表达miR-613通过靶向下调Wee1提高 结直肠癌细胞放疗敏感性的机制研究 %0 Journal Article %D 2019 %J 国际肿瘤学杂志 %R 10.3760/cma.j.issn.1673-422X.2019.03.006 %P 157-165 %V 46 %N 3 %U {https://gjzlx.sdfmu.edu.cn/CN/abstract/article_10606.shtml} %8 2019-03-08 %X 目的研究微小RNA613（miR613）/Wee1分子轴影响结直肠癌细胞放疗敏感性的分子机制。方法选取2016年11月至2017年5月昆明医科大学附属延安医院收治的放疗敏感结直肠癌患者20例、放疗抵抗患者20例，另选取人结直肠癌细胞株LoVo、HCT116，并建立放疗抵抗细胞株LoVo/R、HCT116/R，采用实时荧光定量PCR（qRTPCR）检测miR613和Wee1在结直肠癌组织和细胞株中的表达情况。在结直肠癌放疗抵抗细胞中转染miR613 mimic，未转染细胞为对照组，采用CCK8、Transwell和Western blotting方法检测在不同放疗剂量下，过表达miR613对细胞增殖活力、侵袭能力和细胞周期的影响。进一步实验，采用双荧光素酶报告基因验证miR613与Wee1的靶向关系。在结直肠癌放疗抵抗细胞中转染siWee1或同时转染siWee1和miR613 inhibitor，未转染细胞为对照组，采用CCK8、Transwell和Western blotting方法检测在不同放疗剂量下，miR613/Wee1分子轴对细胞增殖活力、侵袭能力和细胞周期的影响。结果miR613在放疗抵抗结直肠癌患者组织中的表达量低于放疗敏感患者(1.54±0.25∶2.64±0.45；t=3.140，P=0.009)，其在放疗抵抗结直肠癌细胞株中低表达(LoVo/R∶LoVo为1.03±0.12∶3.05±0.15，t=8.944，P=0.006；HCT116/R∶HCT116为1.01±0.11∶2.85±0.16，t=8.050，P=0.008)。同时，与对照组相比，过表达miR613显著抑制结直肠癌放疗抵抗LoVo/R和HCT116/R细胞增殖(LoVo/R细胞：t6 Gy=6.018，P=0.013；HCT116/R细胞：t6 Gy=5.634，P=0.015)，抑制细胞侵袭(LoVo/R细胞：45.00±8.95∶180.15±6.95，t6 Gy=11.93，P=0.003；HCT116/R细胞：49.97±6.21∶170.20±7.03，t6 Gy=12.82，P=0.006)，并下调G2M期相关蛋白细胞周期蛋白依懒性激酶1（CDK1）和cyclin B的表达水平。此外，双荧光素酶报告基因证实miR613靶向作用于Wee1。进一步实验发现，miR613通过靶向下调Wee1显著抑制LoVo/R和HCT116/R细胞增殖（转染siWee1、同时转染siWee1和miR613 inhibitor以及对照组3组比较，LoVo/R细胞：F8 Gy=40.742，P=0.007；HCT116/R细胞：F8 Gy=28.958，P=0.011），抑制细胞侵袭（LoVo/R细胞：F8 Gy=55.413，P=0.004；HCT116/R细胞：F8 Gy=65.634，P=0.003），并将细胞阻滞在G2M期，进而上调LoVo/R和HCT116/R细胞对放疗的敏感性。结论miR613/Wee1分子轴与结直肠癌细胞放疗抵抗性存在调控关系，且过表达miR613可逆转结直肠癌细胞的放疗抵抗性。