%A 崔运福, 郝涛, 王荣华, 李宝松, 马冲, 樊鹏 %T 靶向survivin基因微小RNA真核表达载体的构建及对人结肠癌细胞增殖的影响 %0 Journal Article %D 2015 %J 国际肿瘤学杂志 %R 10.3760/cma.j.issn.1673-422X.2015.01.006 %P 22-26 %V 42 %N 1 %U {https://gjzlx.sdfmu.edu.cn/CN/abstract/article_9523.shtml} %8 2015-01-08 %X 目的 构建靶向survivin基因的微小RNA（miRNA）真核表达载体，探讨其对人结肠癌细胞（HT-29）增殖、凋亡的影响。方法设计合成针对survivin基因的miRNA序列，定向克隆至pcDNATM6.2GW/Em GFPmiR真核表达载体上，构建靶向survivin的miRNA重组质粒。HT29细胞接种于6孔板，分为空白对照组、转染试剂组、空质粒组（阴性对照组）以及目的基因组（阳性对照组）4组。瞬时转染后收集各组细胞，应用流式细胞仪检测各组细胞的增殖指数及凋亡率，实时荧光定量聚合酶链反应和免疫印迹法（Western blot）检测靶基因（survivin）mRNA和蛋白的表达。结果HT29细胞转染后，目的基因组增殖指数与正常组、转染试剂组、空质粒组相比明显降低（17.98%±2.35% vs 38.04%±2.11% vs 36.73%±2.51% vs 36.57%±3.05%; t=20.05，P<0.01；t=18.75，P<0.01；t=18.59，P<0.01），凋亡率明显增高（19.54%±1.74% vs 3.13%±0.29% vs 3.70%±0.44% vs 3.61%±0.50%; t=16.40，P<0.01；t=15.84，P<0.01；t=15.92，P＜0.01）。目的基因组survivin mRNA与其他各组相比明显降低（t=0.68，P<0.01；t=0.58，P<0.01；t=0.61，P<0.01），蛋白的表达亦明显降低（t=0.64，P<0.01；t=0.62，P<0.01；t=0.67，P＜0.01）。结论靶向沉默结肠癌HT-29细胞的survivin基因可以明显抑制细胞增殖，并诱导细胞凋亡。