Nrf2激活剂CDDO-EA抑制蛛网膜下腔出血后神经功能损伤及促进小胶质细胞M2型转化

doi:10.3969/j.issn.2097-0005.2021.09.002

摘要/Abstract

摘要： 目的

探讨新型核因子2相关因子（NFE2 related factor 2， Nrf2）的激活剂CDDO-EA对小鼠蛛网膜下腔出血（subarachnoid hemorrhage，SAH）后神经功能缺损及小胶质细胞极化的影响。

方法

应用大脑中动脉穿刺法制作SAH模型，术后72 h进行神经功能评分，随后处死小鼠并留取脑组织进行冰冻切片，采用免疫荧光双标染色CD206/Iba1标记M2型小胶质细胞。

结果

术后48 h收集各组动物大脑皮层做Western blot检测CDDO-EA表达量，结果表明，50 μg及100 μg CDDO-EA处理组脑内Nrf2表达量较PBS对照组均明显增加（P < 0.05）。我们采用50 μg最佳剂量治疗SAH小鼠，术后72 h对各组动物进行神经功能评分，结果表明SAH模型小鼠具有明显的神经功能障碍，而给予CDDO-EA治疗后神经功能有所改善（P < 0.05）。另外，CDDO-EA治疗后大脑皮层及海马M2型小胶质细胞比Vehicle对照组明显增多。

结论

CDDO-EA治疗蛛网膜下腔出血能够有效改善神经功能，很有可能是通过上调Nrf2表达促进小胶质细胞向M2型转化实现的。

关键词: 蛛网膜下腔出血, Nrf2, 小胶质细胞, CDDO-EA

Abstract: Objective

To investigate the effects of CDDO-EA （CDDO-ethylamide）， a novel Nrf2 related factor 2 （Nrf2）?， on neurological deficit and microglia polarization after subarachnoid hemorrhage （SAH） in mice.

Methods

Thirty healthy C57BL/6 mice were randomly divided into sham group， SAH + PBS group and SAH + CDDO-EA （50 μg） group. The SAH model was made by middle cerebral artery puncture， and the mice were sacrificed 3 days after operation for neurological function score. Brain tissue was collected for frozen sections and the M2-type microglia cells were labeled with CD206/Iba1 by immunofluorescence double staining.

Results

The cerebral cortex of each group was collected 48 h after operation to detect the expression of CDDO-EA by Western blot. Compared with PBS control group， the expression of Nrf2 in brain of 50 μg and 100 μg treatment groups was significantly increased （P < 0.05）.The mice received PBS or CDDO-EA（50 μg） after surgery by intraperitoneal injection. The neurological function score was evaluated 72 h after surgery. SAH mice had obvious neurological dysfunction， but the neurological function was improved after CDDO-EA treatment （P < 0.05）. In addition， the numberof M2 microglia in cerebral cortex and hippocampus after CDDO-EA treatment significantly increased than that in vehicle control group.

Conclusion

CDDO-EA treatment attenuates neurological deficits after SAH， which may be achieved by up-regulating the expression of Nrf2 and promoting microglia polarization toward M2 phenotype.

Key words: subarachnoid hemorrhage, Nrf2, microglia, CDDO-EA

中图分类号:

R741.02

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图/表 7

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项目	表现及评分
自主运动	正常：3分；轻度影响：2分；重度影响：1分；无活动：0分
提住鼠尾悬空时四肢活动对称性	对称：3分；不对称2分；偏瘫：1分
提住鼠尾放置桌面边缘观察前爪伸展	对称：3分；轻度不对称：2分；显著不对称：1分；偏瘫：0分
攀爬和抓持铁笼的能力	攀爬容易且有力：3分；一侧损害表现：2分；不能攀爬或转圈：1分
身体感觉反应	双侧对称：3分；测反应迟钝：2分；一侧无反应：1分；
触碰胡须	对称：3分；不对称：2分；一侧无反应：1分

项目	表现及评分
自主运动	正常：3分；轻度影响：2分；重度影响：1分；无活动：0分
提住鼠尾悬空时四肢活动对称性	对称：3分；不对称2分；偏瘫：1分
提住鼠尾放置桌面边缘观察前爪伸展	对称：3分；轻度不对称：2分；显著不对称：1分；偏瘫：0分
攀爬和抓持铁笼的能力	攀爬容易且有力：3分；一侧损害表现：2分；不能攀爬或转圈：1分
身体感觉反应	双侧对称：3分；测反应迟钝：2分；一侧无反应：1分；
触碰胡须	对称：3分；不对称：2分；一侧无反应：1分

组别	只数	基底皮层区（%）	海马CA1区（%）
假手术组（Sham）	3	8.57 ± 1.43	2.86 ± 0.08
SAH + PBS （Vehicle）	4	27.18 ± 4.30^b	19.85 ± 5.95^a
SAH + CDDO-EA（EA）	4	82.11 ± 5.80	60.69 ± 8.65^c
F		299.8	74.35
P		< 0.0001	< 0.0001

组别	只数	基底皮层区（%）	海马CA1区（%）
假手术组（Sham）	3	8.57 ± 1.43	2.86 ± 0.08
SAH + PBS （Vehicle）	4	27.18 ± 4.30^b	19.85 ± 5.95^a
SAH + CDDO-EA（EA）	4	82.11 ± 5.80	60.69 ± 8.65^c
F		299.8	74.35
P		< 0.0001	< 0.0001