止喘灵注射液雾化给药对过敏性支气管哮喘小鼠模型的治疗作用及安全性评价

betway必威登陆网址（betway.com ）学报››2022,Vol. 43››Issue (11): 805-813.DOI:10.3969/j.issn.2097-0005.2022.11.002

止喘灵注射液雾化给药对过敏性支气管哮喘小鼠模型的治疗作用及安全性评价

牛博(), 吴晗禹, 赵芳, 曹征宇()

中国药科大学中药学院，江苏南京 211198

收稿日期:2022-08-20出版日期:2022-11-25发布日期:2022-12-23
通讯作者:曹征宇
作者简介:牛博，学士，研究方向：离子通道、药理，E-mail：niubo1206@stu.cpu.edu.cn。
曹征宇，主要研究离子通道在疾病发生、发展中的作用，新型离子通道配体的发现以及在疾病中的治疗作用。已在国际著名期刊Nature Communications， Science Signaling， Cell|Chemistry & Biology， Environmental Health Perspectives， Human Molecular Genetics， British Journal of Pharmacology等杂志发表研究论文120余篇。申请专利8项，其中一项美国专利转让给Sage Therapeutics，一个分子（Brexanolone）于2019年在美国上市，用于治疗妇女产后抑郁；另一个分子（Zuranolone）正在申请上市过程中，用于治疗重型抑郁；2项专利转让给江苏康思尔药业股份有限公司，正在进行药物的临床前研究。承担美国NIH抗癫痫药物研发项目1项；主持科技部十三五规划新药创制重大专项任务1项；主持国家自然科学基金面上项目3项；教育部聘请海外名师特色项目1项；江苏省自然科学基金面上项目以及多项来自企业的横向合作项目。获西藏自治区科学技术一等奖（排名第四）。担任国际神经毒理协会会刊NeuroToxicology （2019-2020）和Frontier in Pharmacology （Ethnopharmacology）（2022-）副主编。
基金资助:
国家自然科学基金(21777192);“双一流”高校建设专项资金(CPU2018GF06);江苏省自然科学基金(BK20221054);中央高校基本科研业务费(2632022PY07)

Efficacy and safety evaluation of aerosol inhalation of Zhichuanling injection on bronchial asthma

Bo NIU(), Hanyu WU, Fang ZHAO, Zhengyu CAO()

School of Traditional Chinese Pharmacy，China Pharmaceutical University，Nanjing 211198，China

Received:2022-08-20Online:2022-11-25Published:2022-12-23
Contact:Zhengyu CAO

摘要/Abstract

摘要：

目的探讨止喘灵注射液雾化给药对卵清蛋白（ovalbumin，OVA）诱导的小鼠过敏性支气管哮喘的治疗效果，评价止喘灵注射液雾化吸入给药的安全性。方法通过检测小鼠哮喘的潜伏期和哮喘次数评价哮喘症状的严重程度；通过HE染色观察肺组织病理变化；通过全自动血液分析仪检测支气管肺泡灌洗液中白细胞总数（white blood cell，WBC）、嗜酸性粒细胞（eosinophil，Eos）、淋巴细胞（lymphocyte，Lym）和中性粒细胞（neutrophil，Neu）的数目评价过敏性炎症反应；通过酶联免疫吸附法测定血清中白介素?4（interleukin?4，IL?4）、免疫球蛋白E（immunoglobulin E，IgE）的表达量；通过观察动物一般行为、神经系统反应评价大剂量连续雾化给予止喘灵注射液的安全性。结果雾化吸入不同浓度止喘灵注射液可缓解小鼠哮喘样行为、改善肺组织病理变化、降低支气管肺泡灌洗液中炎症细胞数目及血液中IL?4、IgE表达量。其中以止喘灵注射液稀释1倍（临床剂量）效果最佳，与阳性对照药布地奈德效果相当。雾化吸入相当于20倍临床剂量止喘灵注射液对小鼠一般行为、神经系统、尿液、粪便、唾液、体质量以及摄食量无影响。结论雾化吸入止喘灵注射液是一种安全、有效的治疗小鼠过敏性支气管哮喘的给药方式。

关键词:止喘灵注射液,支气管哮喘,雾化吸入,药效,安全性

Abstract:

ObjectiveTo explore the therapeutic efficacy of nebulized administration of Zhichuanling injection on allergic bronchial asthma in mice induced by ovalbumin （OVA）， and to investigate the safety of high-dose nebulization of Zhichuanling injection.MethodsAnimal welfare and experimental procedures followed the regulations of the Ethics Committee of China Pharmaceutical University. The severity of asthma symptoms was assessed by quantification of the latency and frequency of asthma-like behavior in mice. H&E staining was used to investigate histopathological changes in the lung. The total number of white blood cells （WBC）， eosinophil （Eos）， lymphocyte （Lym） and neutrophils （Neu） in bronchoalveolar lavage fluid were measured by automatic hematology analyzer to evaluate the allergic inflammatory response. Serum levels of interleukin-4 （IL-4） and immunoglobulin E （IgE） were quantified using ELISA. The safety of high-dose nebulization of Zhichuanlin injection was evaluated by examining the general behavior and nervous system response of animals.ResultsOur data demonstrated that the nebulized inhalation of different concentrations of Zhichuanling injection alleviated the asthma-like behavior of mice， improved the pathology of lung tissue， reduced the number of inflammatory cells in bronchoalveolar lavage fluid and the levels of IL-4 and IgG in the blood. Among the doses tested， the 1：1 dilution of Zhichuanling injection （the clinic dose） displayed the best efficacy that was comparable to the positive control， budesonide. Nebulized inhalation of a high dose （20 × clinic dose） Zhichuanling injection did not affect the general behavior， nervous and autonomic nervous system， urine， feces， saliva， body weight and food intake of mice.ConclusionConsidering these data together， nebulized inhalation of Zhichuanling injection may represent an effective and safe drug administration route for bronchial asthma treatment.

Key words:Zhichuanling injection,bronchial asthma,aerosol inhalation,efficacy,security

牛博, 吴晗禹, 赵芳, 曹征宇. 止喘灵注射液雾化给药对过敏性支气管哮喘小鼠模型的治疗作用及安全性评价[J]. betway必威登陆网址（betway.com ）学报, 2022, 43(11): 805-813.

Bo NIU, Hanyu WU, Fang ZHAO, Zhengyu CAO. Efficacy and safety evaluation of aerosol inhalation of Zhichuanling injection on bronchial asthma[J]. Journal of Shandong First Medical Unversity & Shandong Academy of Medical Sciences, 2022, 43(11): 805-813.

图/表5

图1不同剂量止喘灵注射液对小鼠哮喘潜伏期和哮喘行为的影响A为不同剂量止喘灵注射液对小鼠哮喘潜伏期影响；B为不同剂量止喘灵注射液对小鼠哮喘行为的影响。CTRL：生理盐水；OVA：卵清蛋白；Bud：布地奈德；ZCL-Low：止喘灵注射液低剂量；ZCL-Middle：止喘灵注射液中剂量；ZCL-High：止喘灵注射液高剂量。与CTRL组相比，##P ＜ 0.01；与CTRL + OVA组相比，*P ＜ 0.05，**P ＜ 0.01

图2止喘灵注射液对小鼠肺组织病理变化的影响A为小鼠肺组织HE染色切片（比例尺 = 250 μm），黑色箭头指向浸润的炎性细胞；B为小鼠肺组织切片的病理性评分。CTRL：生理盐水；OVA：卵清蛋白；Bud：布地奈德；ZCL-Low：止喘灵注射液低剂量；ZCL-Middle：止喘灵注射液中剂量；ZCL-High：止喘灵注射液高剂量。与CTRL组相比，##P ＜ 0.01；与CTRL + OVA组相比，*P ＜ 0.05，**P ＜ 0.01

图3止喘灵注射液对小鼠支气管肺泡灌洗液中炎症细胞的影响A：各组白细胞数目变化；B：各组嗜酸性粒细胞数目变化；C：各组淋巴细胞数目变化；D：各组中性粒细胞数目变化。CTRL：生理盐水；OVA：卵清蛋白；Bud：布地奈德；ZCL-Low：止喘灵注射液低剂量；ZCL-Middle：止喘灵注射液中剂量；ZCL-High：止喘灵注射液高剂量。与CTRL组相比，##P ＜ 0.01；与CTRL + OVA组相比，*P ＜ 0.05，**P ＜ 0.01

图4止喘灵注射液对小鼠血清中IL-4和IgE含量的影响A为不同剂量止喘灵注射液对小鼠血清中IL-4影响；B为不同剂量止喘灵注射液对小鼠血清中IgE影响。CTRL：生理盐水；OVA：卵清蛋白；Bud：布地奈德；ZCL-Low：止喘灵注射液低剂量；ZCL-Middle：止喘灵注射液中剂量；ZCL-High：止喘灵注射液高剂量。与CTRL组相比，##P ＜ 0.01；与CTRL + OVA组相比，*P ＜ 0.05，**P ＜ 0.01

图5雾化吸入止喘灵注射液对小鼠体质量和摄食量影响A为雾化吸入止喘灵注射液对小鼠体质量影响；B为雾化吸入止喘灵注射液对小鼠摄食量影响

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